Autofluorescence quencher (去除自體螢光)-盟基生物科技股份有限公司

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Autofluorescence quencher (去除自體螢光)

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Immunohistochemistry( 免疫組織化學染色)

Autofluorescence quencher (去除自體螢光)

TrueBlack 創新產品，消除組織自體螢光，且試劑本身沒有螢光，背景值更低。

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組織中的 Lipofuscin 為氧化蛋白質和脂質堆積形成的溶體，通常在老化的細胞組織中比較常見。Lipofuscin 會產生螢光，且同時在所有的 channel 都有螢光，因此會增加螢光染色實驗中的背景值。除了 Lipofuscin 之外，還有 collagen, elastin, red blood cells 等來源也會有螢光。這些螢光被稱為「自體螢光」，造成背景值而影響實驗觀察，Biotium 研發的 TrueBlack Lipofuscin 產品可消除自體螢光。

一、產品介紹
此產品可以有效地消除組織自體螢光，讓螢光實驗中背景值更低 (圖一)，且試劑操作簡單，本身沒有螢光，不影響實驗。
圖一：人類腎臟切片以 ice-cold methanol 固定後，細胞核以 DAPI 作染色 (blue)，以 TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 處理，並以 Zeiss LSM 700 confocal microscope 偵測所有 channel 訊號。可以明顯地看出 TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 可有效地降低自體螢光。


二、產品優點
1. 同時去除 lipofuscin 和 non-lipofuscin 的自體螢光
2. 只要室溫反應5-10分鐘
3. 可於染色前或染色後使用：
染色前使用效果較好，但是可能會降低其他螢光訊號。此產品會在組織細胞上附著一層試劑 (藍色)，且此試劑會被 detergent 洗掉 (Triton® X-100 or Tween® 20)，因此若後續實驗中會用到 detergent，請於染色後使用。
染色前的使用時機為組織固定和打洞後使用，使用後以 PBS 清洗三次，並接續後續染色步驟 (不能含有 detergent)。若於染色後使用，則於使用後一樣以 PBS 清洗三次後，即可加入 mounting medium，並進行螢光觀察。

4. 和他牌相比，此試劑本身螢光背景值更低：
其他廠牌的試劑本身在 far-red 區段有訊號，而 Biotium 產品則背景值較低。且新款的 TrueBlack® Plus Lipofuscin Autofluorescence Quencher 更是完全沒有背景值。
圖二：觀察 Methanol-fixed adult human brain 組織切片的自體螢光，沒有經過抗體處理，而是以 Sudan Black, TrueBlack® 或 TrueBlack® Plus 處理。Sudan Black B 雖然可以消除自體螢光，但是在 far-red 有高度的 red/far-red 螢光背景。TrueBlack® Plus 則完全沒有背景值。


5. 全新配方溶於水溶液 (PBS)：
他牌 Sudan Black 和舊款 TrueBlack® 皆只能使用70% EtOH 作為稀釋溶劑，因此細胞、抗體和其他螢光染劑皆會接觸到70% EtOH，有可能影響螢光效果，同時也會造成樣本萎縮。而新款 TrueBlack® Plus 則以 PBS 作為溶劑，對樣本幾乎沒有傷害，也可反應較長時間。


三、產品資訊
此產品穩定儲存於室溫至少一年，不可置於4℃。
TrueBlack® Plus Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 40X in DMSO 以 PBS 稀釋，而 TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 需以70% ethanol作稀釋。

表一：產品訂購資訊
產品名稱 包裝 貨號
TrueBlack® Plus Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 40X in DMSO 50 uL 23014-T
250 uL 23014
TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 1 mL 23007
     

四、相關產品
針對組織的免疫螢光染色，除了使用上述產品，盟基強烈推薦 TrueBlack® IF Background Suppressor System (Permeabilizing)，此產品可以降低螢光抗體和螢光染劑非專一性吸附造成的背景值 (連結請點我)。

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