Autofluorescence quencher (去除自體螢光)-Cell Biology-盟基生物科技股份有限公司

Cell Staining (細胞染色)

Autofluorescence quencher (去除自體螢光)

Autofluorescence quencher (去除自體螢光)

Cell Staining (細胞染色)

Autofluorescence quencher (去除自體螢光)

TrueBlack 創新產品,消除組織自體螢光,且試劑本身沒有螢光,背景值更低。

組織中的 Lipofuscin 為氧化蛋白質和脂質堆積形成的溶體,通常在老化的細胞組織中比較常見。Lipofuscin 會產生螢光,且同時在所有的 channel 都有螢光,因此會增加螢光染色實驗中的背景值。除了 Lipofuscin 之外,還有 collagen, elastin, red blood cells 等來源也會有螢光。這些螢光被稱為「自體螢光」,造成背景值而影響實驗觀察,Biotium 研發的 TrueBlack Lipofuscin 產品可消除自體螢光。

一、產品介紹
此產品可以有效地消除組織自體螢光,讓螢光實驗中背景值更低 (圖一),且試劑操作簡單,本身沒有螢光,不影響實驗。
圖一:人類腎臟切片以 ice-cold methanol 固定後,細胞核以 DAPI 作染色 (blue),以 TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 處理,並以 Zeiss LSM 700 confocal microscope 偵測所有 channel 訊號。可以明顯地看出 TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 可有效地降低自體螢光。


二、產品優點
1. 同時去除 lipofuscin 和 non-lipofuscin 的自體螢光
2. 只要室溫反應5-10分鐘
3. 可於染色前或染色後使用:

染色前使用效果較好,但是可能會降低其他螢光訊號。此產品會在組織細胞上附著一層試劑 (藍色),且此試劑會被 detergent 洗掉 (Triton® X-100 or Tween® 20),因此若後續實驗中會用到 detergent,請於染色後使用。
染色前的使用時機為組織固定和打洞後使用,使用後以 PBS 清洗三次,並接續後續染色步驟 (不能含有 detergent)。若於染色後使用,則於使用後一樣以 PBS 清洗三次後,即可加入 mounting medium,並進行螢光觀察。


4. 和他牌相比,此試劑本身螢光背景值更低:
其他廠牌的試劑本身在 far-red 區段有訊號,而 Biotium 產品則背景值較低。且新款的 TrueBlack® Plus Lipofuscin Autofluorescence Quencher 更是完全沒有背景值。
圖二:觀察 Methanol-fixed adult human brain 組織切片的自體螢光,沒有經過抗體處理,而是以 Sudan Black, TrueBlack® 或 TrueBlack® Plus 處理。Sudan Black B 雖然可以消除自體螢光,但是在 far-red 有高度的 red/far-red 螢光背景。TrueBlack® Plus 則完全沒有背景值。


5. 全新配方溶於水溶液 (PBS):
他牌 Sudan Black 和舊款 TrueBlack® 皆只能使用70% EtOH 作為稀釋溶劑,因此細胞、抗體和其他螢光染劑皆會接觸到70% EtOH,有可能影響螢光效果,同時也會造成樣本萎縮。而新款 TrueBlack® Plus 則以 PBS 作為溶劑,對樣本幾乎沒有傷害,也可反應較長時間。



三、產品資訊
此產品穩定儲存於室溫至少一年,不可置於4℃。
TrueBlack® Plus Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 40X in DMSO 以 PBS 稀釋,而 TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 需以70% ethanol作稀釋。


表一:產品訂購資訊
產品名稱 包裝 貨號
TrueBlack® Plus Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 40X in DMSO 50 uL 23014-T
250 uL 23014
TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 1 mL 23007
     

四、相關產品
針對組織的免疫螢光染色,除了使用上述產品,盟基強烈推薦 TrueBlack® IF Background Suppressor System (Permeabilizing),此產品可以降低螢光抗體和螢光染劑非專一性吸附造成的背景值 (連結請點我)。